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荧光原位杂交仪酵母双杂交系统

2021-12-27 15:49:40
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荧光原位杂交仪酵母双杂交系统（Y2H)原理：


传统Y2H检测的原理是利用报告基因，其激活依赖于特定的转录因子。具体而言，待测蛋白质X和Y分别与 DNA 结合域 (BD) 和转录因子的激活域 (AD) 融合。BD-X 融合蛋白与报告基因启动子的上游激活子序列 (UAS) 结合。在X和Y之间相互作用时，AD将被募集到启动子，并重建功能性转录因子，从而触发报告基因的后续转录]

作为一种基因技术，酵母双杂交筛选提供了一种敏感且经济的方法来测试两个目标蛋白之间的直接相互作用，或使用蛋白质作为诱饵来筛选从所需的细胞类型、组织或整个生物体制备的蛋白质片段库。通过测序所选酵母菌菌落中相应的质粒，确定相互作用。   


实验步骤：


①创建BD-X诱饵；②通过BD-X诱饵测试自我激活；③执行酵母双杂交筛选和识别猎物


 Y2H检测服务：


 

荧光原位杂交仪设备



为了研究大量蛋白质的相互作用，科学家根据Y2H系统，开发了几种系统以适应不同蛋白质的不同亚细胞定位和生化特征。KMD  Bioscience为客户提供多种系统的服务，以适应不同项目的不同需求。


● 酵母单杂交系统：研究蛋白质-DNA下相互作用

 


图2 Y1H原理示意图


● 酵母三杂交系统：研究第三成分介导的蛋白质的相互作用



图3 Y3H原理示意图


● 分裂泛素Y2H系统：用于研究膜蛋白



客户提供：


--不少于2㎍ 的质粒（含诱饵靶基因）


--该基因的DNA序列，以便我们设计合成方案，进行人工合成（需收费）


交付内容：


--阳性克隆若干及DNA测序结果


--每个阳性克隆不少于2㎍ 质粒


实验周期：约6-8周


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