在三阴性乳腺癌（TNBC）中，联合化疗与检查点抑制剂的益处尚不十分清楚。我们利用单细胞 RNA 和 ATAC 测序来检查 22 名接受紫杉醇或其与抗 PD-L1 atezolizumab 联合治疗的晚期 TNBC 患者的免疫细胞动力学。我们证明高水平的基线 CXCL13 + T 细胞与巨噬细胞的促炎特征有关，并且可以预测对联合治疗的有效反应。在反应性患者中，淋巴组织诱导物 (LTi) 细胞、滤泡 B (Bfoc) 细胞、CXCL13 +T 细胞和常规 1 型树突细胞 (cDC1) 在联合治疗后一致增加，但在紫杉醇单药治疗后减少。我们的数据强调了 CXCL13 + T 细胞在对抗 PD-L1 疗法的有效反应中的重要性，并表明通过紫杉醇方案减少它们可能会损害伴随 atezolizumab 治疗 TNBC 的临床结果。

全自动原位杂交仪在这里，我们研究了接受紫杉醇或其与 atezolizumab 联合治疗的晚期 TNBC 患者免疫细胞的时间动态，并揭示了与患者反应相关的免疫特征。我们的分析表明，在紫杉醇加 atezolizumab 治疗后，Bfoc 而不是 pB 细胞与 LTi 细胞、CXCL13 + T 细胞和 cDC1 协同扩增。值得注意的是，cDC1 已被证明可以作为抗原呈递细胞来启动 CD4+和CD8+T 细胞，并直接协调它们的串扰以实现的抗肿瘤免疫。因此，B 细胞可能通过与 CD4-CXCL13 相互作用并激活 CD4-CXCL13 来促进抗肿瘤免疫，CD4-CXCL13 可以帮助通过 cDC1 启动 CD8-CXCL13。尽管 TLS 已被证明具有预测作用，但应结合 TIL 考虑其重要性。我们的分析为 TLS 中关键免疫细胞亚群之间的细胞串扰提供了信息，并提出了 TLS 对免疫疗法的预测重要性的潜在机制。此外，我们的分析显示高水平的 CXCL9 和 CXCL10，这两种显示出与有效 ICB 反应有关的趋化因子。可能表明TME 中存在 CXCL13+T 细胞。

研究分析表明，紫杉醇方案可以选择性地减少关键的抗肿瘤免疫细胞，但会增加 TNBC 肿瘤中的免疫抑制巨噬细胞，因此可能不会使伴随的 atezolizumab 受益。虽然免疫细胞动力学也可能受到治疗期间疾病进展的影响，但与无反应者相比，反应者的一致模式表明它们与紫杉醇方案相关。关键抗肿瘤免疫细胞的减少可能是由紫杉醇的直接和选择性损伤引起的，可能是由于潜在的肿瘤反应性 T 细胞的增殖状态。值得注意的是，类固醇术前用药是紫杉醇方案的必要程序，据报道类固醇术前用药会削弱抗肿瘤免疫反应。在排除类固醇术前用药的潜在免疫抑制后，需要进一步研究以评估紫杉醇对免疫细胞的影响。此外，不同的化疗药物可能会导致 TME 的不同特性，这可能会影响对伴随检查点抑制剂的反应。需要进一步研究来说明紫杉醇和白蛋白结合型紫杉醇联合 atezolizumab 治疗 TNBC 的机制差异。

我们研究中的两种不同治疗方案只能在具有高水平基线 CXCL13+T 细胞的反应性患者中诱导关键抗肿瘤免疫亚群的相反动态变化。因此，TNBC 肿瘤的内在特性，尤其是 CD8-CXCL13 T 细胞的基线水平，似乎是不同治疗后临床反应和免疫细胞动态模式的关键决定因素。我们推断对于基线CXCL13+T细胞水平高的患者，他们可以耐受紫杉醇方案的有害作用，从而成为反应者，并会在联合治疗后进一步提高CXCL13+T细胞水平。对于低水平 CXCL13+的患者T 细胞，atezolizumab 的作用将无法克服紫杉醇方案的有害作用。值得注意的是，尽管我们的研究结果表明紫杉醇可能会影响伴随的 atezolizumab 的疗效，但尚不清楚紫杉醇是否以及如何影响其他 ICB 抗体，因为不同的组合可能会导致显着差异，每种组合都应在正确的背景下考虑。

我们研究的局限性包括样本量小和活检部位不同。小样本量限制了我们结果的统计显着性。此外，化疗组采集乳腺肿瘤，联合治疗组采集转移性肿瘤，因为这些患者已经进行了乳腺肿瘤手术切除。不同转移部位的免疫浸润水平通常不同，这可能会影响免疫治疗的临床结果。需要进一步的研究来调查控制这些变量后患者的免疫特征。值得注意的是，我们研究中的免疫细胞动力学是根据它们在位点匹配样本中的相对变化进行评估的，因此理论上可以抵消不同组织来源的影响。此外，通过引入 Pi 和 Ti 来研究所有患者免疫细胞组成与临床结果之间的一致模式，我们研究的局限性被部分规避。这两个指数利用连续轴上所有患者肿瘤大小的相对变化，从而避免了对应答者和无应答者的粗略分类。尽管免疫细胞可能表现出组织偏好，我们研究的主要结论是基于免疫细胞没有显示出特定的组织富集，主要发现已被公共数据和 IHC 实验证实。

尽管有这些限制，我们的研究还是提出了其他关键问题。例如，显示高水平 Tn 细胞的 LN 转移患者对联合治疗有反应，表明 LN 转移和 Tn 细胞在预测对 ICB 治疗的有利反应方面具有潜在作用。有趣的是，这些有反应的患者血液中的单核细胞显示出促炎表型，与那些无反应的患者相比，这些患者的血液中特异性富集增殖性 T 细胞，提示系统性免疫激活。我们的发现与之前的研究一致，并且需要进一步的研究来证明 LN 转移如何与 ICB 治疗后全身免疫的激活相关。此外，虽然我们已经看到了血液中免疫细胞与肿瘤中免疫细胞之间联系的有希望的趋势，但还需要进一步的综合研究来建立血液与实体瘤之间的联系，这可能会促进血液衍生免疫生物标志物的发展。

总之，我们的研究阐明了 ICB 治疗期间的关键免疫细胞亚群，并为转移性 TNBC 患者对 PD-L1 阻断的不同反应的细胞基础提供了新的见解，尽管需要进一步调查来验证我们的发现。转录组学和表观遗传数据概要，加上 TCR 序列，将为了解晚期 TNBC 中不同治疗方案后免疫细胞的功能状态和动态提供丰富的资源。已经开发了一个交互式门户网站(http://TNBC_PD-L1.cancer-pku.cn)，以方便广大研究界使用我们的数据。